Hija de Felipe I el Hermoso de Castilla (1504-1506) y de Juana I la Loca de Castilla (1504-1555). Hermana mayor de Carlos I de España (1516-1556; emperador Carlos V, 1519-1556), del emperador Fernando I (1556-1564), de María de Austria (esposa de Luis II Jagellón de Hungría y Bohemia, 1516-1526), de Isabel de Austria (esposa de Cristián II el Malo de Dinamarca, 1513-1523, Noruega, 1513-1523, y Suecia, 1520-1523) y de Catalina de Austria (esposa de Juan III el Piadoso de Portugal, 1521-1557).
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